復方頭孢氨芐膠囊由頭孢氨芐和甲氧芐啶兩種成分制成，由于二者合用可雙重阻斷**在生長繁殖過程中細胞壁及菌體內核酸、蛋白質合成，從而顯示較好的**作用，其**作用相當于倍量頭孢氨芐。頭孢氨芐（Cefalexin），***\β-內酰胺類\頭孢菌素類。它能抑制細胞壁的合成，使細胞內容物膨脹至破裂溶解，殺死**。

本文用高效液相色譜法（HPLC法）測定復方頭孢氨芐片中頭孢氨芐的含量。

1 儀器與試劑

儀器：DIONEX P680AISO型高效液相色譜儀、UVD17OU型HPLC檢測器、梅特勒電子分析天平

試劑：甲醇（色譜純、分析純）、純凈水

標準對照樣品：頭孢氨芐對照品（中國藥品生物制品檢定所）

試驗樣品：頭孢氨芐膠囊

2 試驗過程

2.1  色譜條件與系統適應性實驗

    用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（色譜柱 Dikma Technologies Diamonsil^TM C₁₈, 5m, 250×4.6mm）；水-甲醇-3.85%醋酸鈉溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）為流動相；檢測波長為254nm；理論塔板數按頭孢氨芐峰計算不低于1500；流速：1 ml.min^-1。

2.2  對照品儲備液的制備

     準確稱取頭孢氨芐對照液10 mg，置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.3  試驗樣品溶液的制備

     取10個膠囊，準確稱取質量，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢氨芐0.1 g），置100 ml容量瓶中，加流動相適量，充分振搖使溶解，再加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 ml置10 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4  陰性空白溶液的制備

     按頭孢氨芐膠囊的制備工藝制備缺主藥的模擬膠囊，按照“供試品溶液的制備”項下所制備得出的溶液作為陰性空白溶液。

2.5  專屬性試驗

     在上述色譜條件下，分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性空白溶液各10 μl進樣，記錄色譜圖，觀察樣品峰的保留時間是否有雜峰。

3  試驗結果

3.1  儀器精密度試驗

     精密量取對照品儲備液1.0 ml 置10 ml量瓶中，加流動相至刻度（即線性關系考察中的第三個對照品溶液），重復進樣5次，每次10 μl，在上述色譜條件下進行分析，計算峰面積的RSD，要求RSD不大于2%。

本實驗采用對照品溶液(線性關系中第三個溶液)重復進樣5次，進行儀器精密度的考察。實驗結果顯示，RSD值為1.13%，符合RSD小于2%的要求。證明儀器精密度良好。

3.2  方法重復性實驗

     取主藥粉末5份精密稱定，按照“供試品溶液的制備”項，平行制備樣品溶液5份，按樣品測定方法測定，算出頭孢氮芐峰面積的RSD。

本實驗共制備5份供試品溶液，各吸取10μL連續進樣進行重復性試驗。實驗結果表明RSD值為8.44%，不符合RSD小于2%的要求，重復性實驗較差。 說明在制備溶液過程中存在較大的操作偏差，而且在測定供試品色譜圖時也存在操作不熟練或者不規范的現象以及進樣誤差等問題。在以后的試驗中應該加以改正。

 3.3  線性關系考察

     依次精密量取對照品儲備液0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml 、2.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，各進樣10 μl，記錄色譜圖。以進樣濃度（μg /ml）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。以峰面積A對濃度C回歸，得回歸方程。所得標準曲線如下圖：

結果表明，頭孢氨芐濃度在20-200 μg/mL范圍內與峰面積有良好線性關系，相關系數 r=0.9993。

3.4  加樣回收率試驗

     采用加樣回收法，精密稱取 9 份已知含量的同批號頭孢氨芐膠囊樣品（約相當于頭孢氨芐0.05 g）置于10 ml容量瓶中，精密稱定，再分別精密稱取頭孢氨芐對照品0.625 g，置 25 ml 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1 ml，2 ml，3 ml，各三份，加到上述供試品中，按“供試品溶液的制備”項操作制備溶液，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，按以下公式計算回收率：

回收率%=（測定平均值-本底量）/加入量×100%

其中本底量為加入流動相的量，加入量為加入對照品和供試品的量。

3.5  穩定性試驗

    取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h進樣，各進樣10 μl，記錄色譜圖，峰面積若小于±1.0％，則樣品溶液穩定性較好。

3.6  方法耐用性考察

    分別使用不同流動相組成、不同流動相pH值、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、不同柱溫和不同流速等，對同一批樣品進行測定，觀察其結果是否一致。

3.7 樣品含量測定

    分別取對照品溶液和供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積外標法計算含量。

本實驗是利用外標法中標準曲線法對頭孢氨芐膠囊中頭孢氨芐的含量進行測定。此法優點在于不需要知道校正因子，只要被測組分全部出峰、無干擾、保留時間適 宜，就可以進行定量分析。而且操作簡單、快捷，應用非常廣泛。本次實驗結果不是十分理想，說明在制備溶液過程中存在較大的操作偏差，而且在測定供試品色譜 圖時也存在操作不熟練或者不規范的現象以及進樣誤差等問題。在以后的試驗中應該加以改正。